目的：

研究抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine　dithiocarbamate，PDTC)体外对宫颈癌HeLa和SiHa细胞生长抑制及凋亡的影响，以及PDTC与卡铂联合作用对宫颈癌HeLa和SiHa细胞凋亡的影响及其作用机制，为PDTC作为宫颈癌化疗的辅助治疗方面提供重要的实验室基础和理论依据。

方法：

1.　采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法，分别检测不同浓度PDTC,卡铂及PDTC和卡铂联合作用对宫颈癌HeLa和SiHa细胞生长抑制的影响，计算细胞生长抑制率和IC50。

2.　采用光学倒置显微镜观察空白组，PDTC,卡铂及PDTC和卡铂联合作用HeLa和SiHa后的细胞形态改变。

3.　采用流式细胞仪检测空白组，PDTC，卡铂及PDTC和卡铂联合作用HeLa和SiHa后的细胞凋亡率。

4.　采用流式细胞仪检测空白组，PDTC,卡铂及PDTC和卡铂联合作用HeLa和SiHa后的细胞周期。

5.　免疫细胞化学法测定，空白组，PDTC，卡铂及PDTC和卡铂联合作用后NF-κBp65在宫颈癌HeLa和SiHa细胞中胞浆、胞核表达分布的变化。

结果：

1.　PDTC浓度为12.5μM、　25μM、50μM和100μM时，作用12、24、36h都能够明显抑制HeLa和SiHa细胞的增殖，具有时间和剂量依赖性，与对照组比较差异有显著性（P＜0.01）。12、24、36h，HeLa和SiHa细胞的半数抑制率IC50所需的PDTC浓度分别为170.1772μM，149.7943μM，133.5351μM和172.5752μM，148.3634μM,　123.1695μM。

2.　卡铂联合应用PDTC时能够显著提高卡铂杀伤宫颈癌HeLa和SiHa细胞的作用。对于HeLa细胞，20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml卡铂分别作用24h时，细胞生长抑制率仅为10.13％、19.68％、40.04％和69.86％，12.5μM　PDTC预处理1h后再分别加入上述浓度的卡铂作用24h后其细胞生长抑制率则为19.07％、38.65％、66.7％和87.85％。对于SiHa细胞，相同浓度的卡铂作用24h时，细胞生长抑制率仅为：11.37％、20.88％、41.5％和71.29％联合用药组细胞生长抑制率为　20.31％、40.02％、67.91％和89.22％。联合用药组与单用卡铂组对宫颈癌HeLa和SiHa细胞的生长抑制率相比，差异都有显著性（P＜0.01）。卡铂对HeLa和SiHa细胞的IC50值分别由97.29μg/ml和92.76μg/ml降低到50.31μg/ml和48.05μg/ml。

3.　采用流式细胞仪检测空白组、12.5μM　PDTC，40μg/ml卡铂及联合用药组对宫颈癌HeLa和SiHa细胞诱导凋亡的作用,作用24h后，HeLa和SiHa细胞凋亡率分别为2.03%、8.78%、15.64%，26.84%，和2.78%、12.87%、18.45%、34.62%，各药物组与对照组比较及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组分别比较差异有显著性（P＜0.01）。

4.　采用流式细胞仪检测空白组，12.5μM　PDTC，40μg/ml卡铂及联合用药组作用24h对宫颈癌HeLa和SiHa的细胞周期的影响，HeLa和SiHa细胞经PDTC作用后G0/G1期比例较对照组都明显增加（P＜0.01），S期比例均降低（P＜0.01）；卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期；联合用药组都使细胞周期进一步阻滞于G2/M期，且与对照组比较，都降低了S期比例（P＜0.01）。各组药物作用后对HeLa和SiHa细胞株细胞周期的影响相似。

5.　免疫细胞化学法显示，对于HeLa和SiHa细胞，空白对照组中NF-κB　p65主要表达于胞浆内,染色成棕黄色,胞核内可偶见棕黄色颗粒。12.5μM　PDTC　作用24h后,胞浆内棕黄色颗粒减少　40μg/ml卡铂作用24h后胞浆染色变深,胞核内的棕黄色颗粒亦明显增加两药联合使用后,　胞浆和胞核的染色较单用卡铂组变浅，提示胞浆和胞核内NF-κB表达轻度下降。这表明卡铂作用后使得NF-κB激活，PDTC能够抑制卡铂对NF-κB的激活，从而影响其对下游基因的转录。

结论：

1.　抗氧化剂PDTC能够有效地抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的增殖。

2.　抗氧化剂PDTC与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌HeLa和SiHa细胞的生长抑制作用及促凋亡作用，能够降低卡铂对宫颈癌HeLa和SiHa细胞的IC50值，减少化疗药物的毒副作用，提高疗效。

3.　宫颈癌HeLa和SiHa细胞中的NF-κB可被卡铂激活，抗氧化剂PTDC能阻止卡铂诱导的NF-κB的活化，从而抑制NF-κB调控的下游抗凋亡基因的表达，提高宫颈癌细胞对卡铂的敏感性。　

4.　抗氧化剂PDTC有望为宫颈癌辅助治疗带来新的前景。