摘　　要
背景：
肝细胞癌（Hepatocellular　carcinoma，HCC）是原发性肝癌（Primary　Liver　Cancer）中最常见的病理类型，是我国常见的恶性肿瘤之一，并已经成为世界上癌症相关死亡原因中的第三大致死因素。当下，主要的治疗手段包括手术切除及肝移植。但是，肝内、全身转移以及术后复发的原因仍然限制着术后整体生存率。因此，探究肝癌转移和复发的机理以寻找新的治疗方法和手段显得尤为重要。现有的研究已发现，肝癌中存在着许多异常表达的分子，同时他们对肝癌的发生发展有着一定的促进作用。当前，分子靶向药物已经成为治疗肝癌新的手段，因此寻找新的分子及其潜在的机制也有助于找到确实有效的治疗癌症的办法。
微小RNA　(MicroRNA，miRNAs)是一组非编码小RNA，在转录后水平调节多种生物学进程，包括增值，迁移，凋亡等。以往的研究表明，异常表达的miRNAs与癌症的形成，生长，转移等相关。miR-1258作为一个重要的抑癌基因，在乳腺癌，肺癌中均为低表达，主要通过调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移以及细胞周期等生物学进程发挥其作用，但其具体的在肝癌中促进侵袭转移的机理仍然尚不明确。
上皮细胞间质转化（EMT）是指上皮细胞在特定条件下逐渐失去某些特有的上皮细胞特点，逐渐获得一些间质细胞表型，随之表现出间质细胞的某些性质。目前的研究表明由细胞自身调控的EMT进程可以促进肿瘤细胞的扩散。　
目的：
在HCC组织及其对应的癌旁组织中通过检测miR-1258的表达，分析其与临床病理特征及预后的关系。在不同细胞系中上调或者敲低miR-1258从而分析其对HCC侵袭和迁移的影响，为找寻HCC新的治疗靶点提供一定的理论基础。
方法：
1.　使用Real-time　PCR法检测HCC组织及其相应的癌旁组织中miR-1258的表达，使用统计学方法分析分析其与临床病理特征及预后的关系；
2.　使用Real-time　PCR法在永生化人肝细胞系LO2及HCC细胞系Huh7、HepG2、MHCC-97H、Hep3B、SMMC-7721中miR-1258的表达情况；使用miR-mimic转染于低表达miR-1258的SMMC-7721细胞，转染miR-inhibitor于高表达miR-1258的Hep3B细胞，用Real-time　PCR检测转染后表达水平。应用划痕实验、Transwell小室测定转染前后细胞的迁移能力的变化，用铺基质胶的Transwell小室测定转染前后细胞的侵袭能力的变化。
3.　使用Western　blot法检测SMMC-7721及Hep3B细胞，以及分别上调或下调后miR-1258，HCC细胞中EMT标志性蛋白（E-cadherin及Vimentin）的表达变化。
结果：
1.　HCC组织中的miR-1258的表达水平显著低于其相应的癌旁组织，与对照组相比，miR-1258在具有较多的肿瘤数目（n≥2）、存在静脉侵犯及较晚期HCC患者（T分期III或IV）的HCC组织中的表达水平明显降低。miR-1258高表达组的HCC患者的无瘤生存率与总体生存率均明显高于miR-1258低表达组。
2.　HCC细胞系中，miR-1258的表达水平显著低于正常肝细胞系LO2，并且其在SMMC-7721细胞表达最低，在Hep3B细胞表达最高。将miR-mimic以及miR-inhibitor转染于HCC细胞，上调及下调miR-1258后，与对照组相比，上调miR-1258明显抑制HCC细胞的侵袭和迁移，而下调miR-1258后促进了HCC细胞的侵袭和迁移。
3.　与高表达miR-1258的HCC细胞相比，低表达的HCC细胞E-cadherin表达水平较低而　Vimentin表达水平较高。上调miR-1258后的HCC细胞中E-cadherin的表达水平升高，Vimentin的表达水平下降；而下调miR-258后的HCC细胞中的E-cadherin的表达水平下降，Vimentin的表达水平升高。
结论：
1.　miR-1258在肝癌组织中表达明显低于癌旁组织，其与恶性临床病理特征及不良预后相关，说明miR-1258的下调可能参与了肝癌的发生发展。
2.　miR-1258可抑制HCC的侵袭和迁移。
3.　miR-1258通过负向调控HCC的EMT可能是其影响HCC侵袭迁移的重要机制之一。

关　键　词：肝细胞肝癌；miR-1258；侵袭；迁移；EMT
论文类型：应用基础