乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，近年来有发病年轻化及发病率上升的趋势，严重威胁着女性的身心健康，乳腺癌患者常死于肿瘤复发和转移，而肿瘤的局部浸润和转移是其难治性的根本原因，因此深入研究其转移机制尤为重要。
2003年Mitsui和Chamber在胚胎干细胞中新发现一种重要的转录因子，并将其命名为Nanog，其主要作用是维持胚胎干细胞自我更新、细胞分化。Nanog属于ANTP同源基因家族，其定位于12p13.31。近年来研究发现Nanog在肝癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、宫颈癌、膀胱癌及胰腺癌等肿瘤组织中高表达。其过表达与肿瘤细胞增殖、耐药、侵袭、迁移以及上皮间充质转化（Epithelial-Mesenchymal　Transition,　EMT）密切相关。抑制其表达可抑制其恶性生物学特征。目前，Nanog在乳腺癌中的表达水平及其与临床病理特征及预后的关系尚存在争议。此外其在高危复发风险乳腺癌患者（即腋窝阳性淋巴结数1-3个且HER-2过度表达或neu基因扩增或者阳性淋巴结数≥4）中尚无报道。
EMT是指上皮细胞转变为间质表型细胞的生物学过程。其在胚胎发育、慢性炎症和肿瘤侵袭转移中发挥着重要作用。肿瘤细胞发生EMT时细胞表型发生改变，其上皮标志物E-cadherin表达下调，而间充质标志物Vimentin、N-cadherin表达上调，其中E-cadherin的缺失是EMT最重要的标志性事件。近年来研究报道Nanog参与肝癌、卵巢癌、结直肠癌等肿瘤EMT的发生，在乳腺癌中报道甚少。
因此本实验主要探讨Nanog蛋白在高危复发风险乳腺癌中的表达与预后，同时在高侵袭和高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞中探讨Nanog是否通过诱导肿瘤细胞发生EMT而促进肿瘤侵袭和转移。
实验目的：
1.　探讨Nanog蛋白在高危复发风险乳腺癌病人中的表达及预后。
2.　在乳腺癌MDA-MB-231细胞中探讨Nanog是否通过诱导EMT发生而促进肿瘤侵袭和转移。
实验方法：
1.　收集66例高危复发风险乳腺癌标本，应用免疫组织化学SP法检测Nanog蛋白在乳腺癌组织的表达，并分析其表达与临床病理特征和预后之间的关系。
2.　采用小干扰RNA下调乳腺癌MDA-MB-231细胞中Nanog表达，　伤痕愈合实验、Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的改变，Western　blot检测Nanog及E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达变化。
实验结果：
1.　免疫组化结果显示Nanog蛋白在高危复发风险乳腺癌肿瘤组织中的阳性表达率为56%（37/66），其表达与肿瘤大小、淋巴结转移数、TNM分期呈正相关（P＜0.05），与患者年龄、Ki67无明显相关性（P＞0.05）。
2.　生存分析显示在高复发风险乳腺癌患者中Nanog阳性表达组患者5年IDFS明显低于Nanog阴性表达者（P＜0.05）。
3.　小干扰RNA能有效下调乳腺癌MDA-MB-231细胞中Nanog表达。
4.　伤痕愈合实验和侵袭实验显示与对照组相比，　si-Nanog2转染组的乳腺癌细胞迁移和侵袭能力明显受抑（P＜0.05）。
5.　下调Nanog表达可以逆转乳腺癌MDA-MB-231细胞的EMT过程。
结论：
Nanog在高危复发风险乳腺癌肿瘤组织中高表达，且其表达与患者预后不良相关；Nanog通过诱导乳腺癌细胞发生EMT而促进乳腺癌侵袭和转移。这些结果显示Nanog可能参与乳腺癌的发生发展，在乳腺癌转移过程中起重要作用。

关　键　词：乳腺癌；Nanog；EMT；预后
论文类型：应用基础