前言：口腔颌面部软骨组织缺损会影响患者的颜面美观及器官功能，进而造成患者的自卑情绪，影响其人际交往。一些传统的治疗方法，如自体软骨组织、异体软骨组织和一些替代的软骨组织，不能达到软骨组织的功能和生理组织结构，软骨组织工程技术的快速发展为软骨组织的重建、修复和再造提供了另一种全新的治疗方法，然而种子细胞来源是阻碍当前组织工程软骨发展的一个主要因素。在前期的研究中，软骨组织工程的种子细胞分为软骨细胞和干细胞。软骨细胞来源有限，扩增能力有限，取材时会增加创伤，增加患者痛苦和经济负担。胚胎干细胞的多能性和分化机制是未知的，有恶性分化的风险，其来源和应用是有限的，受宗教信仰，伦理和法律的限制。为了避免免疫排斥问题，具有向多谱系细胞分化能力的成体干细胞取自患者本人。近年来以骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞作为种子细胞，为软骨组织工程取得了一定的成就，但由于病毒污染，组织来源有限，免疫排斥，取材时组织损伤，其干细胞的数量、增殖、分化能力可随年龄增长而降低等问题的限制，寻求其他合适的替代软骨组织工程种子细胞来源，一直是许多研究学者关注的焦点。与骨髓间充质干细胞相比，人脐血间充质干细胞（human　umbilical　cord　blood　mesenchymal　stem　cells，HUCB　MSCs）具有长期传代不改变、来源丰富、无异体排斥、易于采集和保存等很多优点，脐血的应用还避开了社会伦理及法律等诸多争议，并且具有向软骨细胞、心肌细胞分化的多向分化潜能。脐血可作为间充质干细胞的来源已经被广泛接受，因此脐血间充质干细胞在组织工程领域具有广阔的应用前景。然而HUCB　MSCs在临床应用上，诱导软骨分化率低是主要问题之一，使其面临很多挑战。因此，目前迫切需要解决的问题是研究HUCB　MSCs向软骨分化的分子机制。　Sox9（SRY-related　high　mobility　group-box　9）为胚胎早期发育的相关基因，主要在软骨细胞及成软骨祖细胞中表达。Sox9不仅参与调控体内软骨组织发育，也在干细胞体外分化为软骨细胞中扮演了重要角色。　研究目的：从人脐血中分离间充质干细胞后，在人脐血间充质细胞中过表达Sox9诱导软骨细胞分化，观察Sox9基因转染对hUCB　MSCs生物学特性的影响，以及经Sox9基因修饰的HUCB　MSCs向软骨细胞分化的能力，为软骨组织疾病及损伤的治疗提供实验依据。研究方法：1.　采集正常足月顺产胎儿脐带血，采用密度梯度离心法分离单个脐血核细胞，使用贴壁法获得间充质干细胞。2.　分为三组：PBS代替质粒转染HUCB　MSCs（空白对照组）；空载体质粒转染HUCB　MSCs（实验对照组）；Sox9质粒转染HUCB　MSCs（实验组）。在不同时间点收集细胞，通过甲苯胺蓝、免疫细胞化学、RT-PCR、Western　blot检测软骨细胞蛋白聚糖、特异性分子Ⅱ型胶原的表达量，观察Sox9过表达对软骨细胞分化的影响。研究结果：1.　50份样本中，有34份可以获得贴壁生长可以传代的成纤维细胞样的细胞，剩余16份的样本中破骨细胞占大多数。34份样本4d首次换液时，可以看到更多的散在分布折光性好的梭形细胞或纺锤形细胞。约7d后细胞形成集落，体积较前明显增大，呈多角形或长梭形。细胞集落逐渐增多，融合成片。细胞碎片和悬浮细胞随换液过程越来越少，到第l2d基本消失。培养3wk左右，细胞集落的融合度约达到60%。传代细胞接种后形态呈圆形，折光性好。细胞在2h后开始贴壁，12h后贴壁的细胞可达到90%以上，并逐渐恢复为原代贴壁时所呈现的梭形，传代后的细胞散在均匀分布，不再形成集落；2d后细胞开始增殖，4d后增殖加速，细胞形态均一，10d左右即可达80～90%融合，细胞排列有方向性。第3代以后，贴壁的细胞为均一的长梭形，细胞增殖加快，1wk左右可达80-90%融合，为典型成纤维细胞样。2.　诱导48h后，实验组细胞呈梭形，对照组细胞也呈梭形。实验组细胞逐渐由原来的长梭形开始变为宽阔、平坦的长三角形或多边形，原有的细胞突突起变短，细胞折光性减弱。7d出现细胞自发性聚集的情况，第14d细胞聚集明显增大，21d左右，形成较大的软骨结节。甲苯胺蓝染色结果：第10d实验组细胞中有大量的甲苯胺蓝异染性物质。空白对照组和实验对照组为阴性。免疫组化染色结果：在诱导培养的第21d，实验组Ⅱ型胶原免疫组化为阳性，可见棕黄色的颗粒分布在细胞胞浆内。空白对照组和实验对照组为阴性。RT-PCR结果：第3、7、10d、14d空白对照组和实验对照组均无II型胶原表达；实验组第7d开始表达II型胶原，随着时间推移，表达逐渐增多。空白对照组和实验对照组均无蛋白多糖表达，实验组第21d开始表达蛋白多糖。Western　blot分析：采用Western　blot检测II型胶原含量，可以看出实验组第7天开始表达II型胶原，随着时间推移，表达逐渐增多，与对照组有统计学差异（P