目的：
　　　首先应用RT-PCR技术对不同孕周的正常健康妊娠孕妇外周血浆中PLAC4　mRNA基因进行定性检测，以了解该基因是否在孕妇外周血浆中表达；其次，应用实时荧光定量RT-PCR技术对不同孕周正常健康妊娠孕妇、妊娠中期唐氏筛查高危孕妇、健康育龄未妊娠女性及正常分娩后24小时女性的外周血浆中PLAC4　mRNA基因进行定量检测，寻找唐氏综合征产前诊断的可靠生物学标志物，为无创性产前诊断提供新的思路和方法。
　　　方法：
　　　1.　PLAC4　mRNA基因的定性检测：按入组标准随机选取妊娠早期、中期、晚期的正常健康妊娠孕妇各5例，分别提取各组孕妇外周血浆中PLAC4　mRNA基因，应用RT-PCR技术对其进行扩增，通过1.5%琼脂糖凝胶电泳观察不同孕周正常健康妊娠孕妇外周血浆中PLAC4　mRNA基因的表达情况。
　　　2.　PLAC4　mRNA基因的定量检测：按入组标准随机选取健康育龄未妊娠女性5例，正常健康妊娠孕妇50例（早期妊娠10例、中期妊娠20例、晚期妊娠20例），妊娠中期唐氏筛查高危孕妇8例，正常分娩后24小时女性5例，共收集外周血浆样本68例。应用实时荧光定量RT-PCR技术，检测各组样本中的PLAC4　mRNA基因含量，并进行相对定量分析，以了解各样本中PLAC4　mRNA基因含量的变化。
　　　结果：
　　　1.　PLAC4　mRNA基因的定性结果：在不同孕周的正常健康妊娠孕妇外周血浆中PLAC4　mRNA基因均可以表达。
　　　2.　PLAC4　mRNA基因的定量结果：1）5例健康育龄未妊娠女性外周血浆中均未检出PLAC4　mRNA基因；2）5例正常分娩后24小时女性外周血浆中均未检出PLAC4　mRNA基因；3）50例正常健康妊娠孕妇外周血浆中共46例检测出PLAC4　mRNA基因，中期妊娠PLAC4　mRNA基因的含量是早期妊娠的1.99倍，晚期妊娠PLAC4　mRNA基因的含量是早期妊娠的3.73倍；4）8例妊娠中期唐氏筛查高危孕妇均检出PLAC4　mRNA基因，含量是早期妊娠的6.36倍；5）8例妊娠中期唐氏筛查高危孕妇组中，有1例孕妇通过羊水穿刺后染色体核型分析确诊为唐氏综合征患儿，这一例孕唐氏综合征患儿孕妇外周血中PLAC4　mRNA基因的△Ct值测定为3.71，低于唐氏筛查高危组的平均△Ct值（5.57±1.18），也是唐氏筛查高危孕妇组中△Ct的最小值；6）各组中PLAC4　mRNA基因的检出量具有显著性差异。
　　　结论：
　　　1）健康育龄未妊娠女性及正常分娩后24小时女性外周血浆中均无胎儿游离PLAC4　mRNA基因的存在，正常健康妊娠孕妇外周血浆中存在胎儿游离PLAC4　mRNA基因，证实了PLAC4　mRNA基因是妊娠可靠的胎儿特异性分子标记物；2）在正常健康妊娠孕妇的外周血浆中胎儿游离PLAC4　mRNA基因的检出量与孕周有相关性，随着孕周增加其检出量升高，提示孕妇外周血中胎儿游离RNA的含量随着妊娠进展而增加；3）妊娠中期唐氏筛查高危孕妇外周血浆中均存在胎儿游离PLAC4　mRNA基因，且基因含量高于正常健康妊娠组；4）CT值越小样本的起始拷贝数越多，所以孕唐氏综合征患儿孕妇外周血浆中PLAC4　mRNA基因含量高于唐氏筛查高危但妊娠结局正常者，异常高于正常健康妊娠组，表明PLAC4　mRNA基因有望成为唐氏综合征产前诊断的可靠生物学指标。
　　　
关　键　词：PLAC4　mRNA；孕妇外周血浆；胎儿游离RNA；无创性产前诊断
论文类型：应用研究