目的：
1. 探讨Notch信号通路在人妊娠滋养细胞肿瘤发生发展过程中的重要作用。
2. 检测γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路后Notch1　mRNA水平的变化情况及对肿瘤细胞增殖能力的影响，为进一步实验研究提供实验依据。
3. 检测E-钙粘蛋白在肿瘤细胞中的表达情况及γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路后对E-钙粘蛋白表达的影响，探讨Notch信号通路与EMT之间的关系及二者在人妊娠滋养细胞肿瘤发生发展过程中的作用，为进一步实验研究提供实验依据。
方法：
1. 体外培养JAR和JEG-3两种人绒毛膜癌细胞株，细胞稳定传代3代以后，实时荧光定量qPCR技术检测细胞中Notch信号系统的表达情况。
2. 将JAR、JEG-3两种细胞分别分为实验组和对照组：实验组以不同浓度DAPT处理，溶剂对照组加入溶剂DMSO（体积分数＜0.1%），并设空白对照组（只加入等量培养液），利用MTT法测定细胞活性，评价DAPT对JAR和JEG-3细胞增殖的影响。
3. 根据MTT结果选取合适的DAPT浓度和作用时间，利用qPCR法检测Notch1基因mRNA水平的表达变化。
4. 采用Western　Blot法检测DAPT阻断Notch信号通路后JAR细胞中E-钙粘蛋白的表达情况。
结果：
1. JAR和JEG-3细胞中存在Notch1信号的表达。
2. 10μmol/L　DAPT作用48h开始抑制JEG-3细胞生长，1μmol/L和5μmol/L浓度从72h开始明显抑制JEG-3细胞生长。15μmol/L　DAPT作用48h开始抑制JAR细胞生长，10μmol/L　DAPT在48h抑制JAR细胞生长，72h和96h未表现明显抑制作用，5μmol/L　DAPT在各时间点均未表现出明显抑制JAR细胞生长的作用。
3. JEG-3细胞中，1μmol/L和10μmol/L组Notch1　mRNA表达下调，而两组之间无差异（P＞0.05）。10μmol/L和15μmol/L组也能抑制JAR细胞中Notch1　mRNA的表达，且两组之间有差异（P＜0.05）。
4. DAPT能上调JAR细胞E-cad的表达。
结论：
1. Notch信号通路在JEG-3、JAR细胞的增殖中发挥重要的调控作用，Notch1在妊娠滋养细胞肿瘤发生发展过程中可能起促癌作用；
2. Notch信号通路和EMT与妊娠滋养细胞肿瘤的发生发展有关；
3. γ-分泌酶抑制剂DAPT可以通过抑制JEG-3和JAR细胞中的Notch通路的激活，从而抑制细胞增殖，上调E-钙粘蛋白的表达其作用，这种作用呈浓度和时间依赖性，γ-分泌酶抑制剂DAPT或可成为妊娠滋养细胞肿瘤治疗的一个新靶点。　
关　键　词：滋养细胞肿瘤；Notch信号通路；γ-分泌酶抑制剂；DAPT；E-钙粘蛋白

论文类型：研究报告