目的：
假性甲状旁腺功能减退症（PHP）是由于靶器官对甲状旁腺素（PTH）的抵抗而导致的罕见的遗传性疾病，患者主要表现为低钙血症、高磷血症和高PTH血症。PHP常见的类型有PHPIa型、PHPIb型和PPHP（假假性甲状旁腺功能减退症），均与刺激性G蛋白的α亚单位（Gsα）的结构或功能异常导致的失活有关。GNAS基因是一种复合的印记基因，主要由13个外显子和12个内含子组成，该基因通过上游各不相同的启动子分别连接到下游共同的2-13号外显子上转录、翻译产生多种基因产物，其主要编码产物即Gsα，在绝大多数组织和器官中，父母来源的双侧等位基因上均有Gsα表达，但在某些器官和组织中该基因只在转录于母源等位基因；另外GNAS基因启动子区有三个差异甲基化区域（DMR），分别为外显子1A、NESP55和XLαs，每个区域在特定的一侧等位基因上发生甲基化而在对侧等位基因上发生去甲基化，使得该片段的表达只发生在未甲基化的等位基因上。PHPIa是由GNAS基因的1-13号外显子发生各种类型的失活突变所导致的，这类患者不但表现出对PTH的抵抗，还存在对诸如促甲状腺激素（TSH）和促性腺激素等其它多种内分泌激素的抵抗，并且相当数量的患者有Albright遗传性骨营养不良症（AHO）；而PHPIb仅存在对PTH的抵抗而没有特殊体貌特征，其致病原因与DMR甲基化异常导致的印记缺陷有关。本研究收集并整理了4例中国PHPIb患者的临床资料，对患者及其父母的GNAS基因外显子突变进行检测，并且对DMR的甲基化状态进行检测和分析，以明确疾病分型，以探讨该病的分子遗传学机制，提高对疾病的认识和减少误诊，并为寻找新的治疗方法提供理论基础。
方法：
收集西安交通大学第一附属医院内分泌科2008-2012年收治的4例散发型PHPIb患者的临床资料，并了解患者父母的健康状况，同时选取10例健康体检者作为正常对照。1）整理临床资料，包括临床症状和体征、既往病史、家族病史、血生化检查、影像学检查和眼科的检查等。2）抽取4例患者、4对父母以及10例正常对照者的外周血，用红细胞裂解液裂解细胞后以1%SDS-PK消化白细胞，采用酚-氯仿-异戊醇法抽提获得基因组DNA，测定浓度。3）对GNAS基因的1-13号外显子分别设计引物，应用聚合酶链反应（PCR）和直接测序法进行外显子突变的检测。4）用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）的方法对GNAS的3个DMR区域进行甲基化状态的检测。5）分析实验结果。
结果：
1）临床资料的收集显示：4例患者中女性2例，男性2例，发病年龄3-21岁，病程2　-19年。均无头颈部手术史或放射治疗史，无明显家族史。4例患者均以“反复发作的四肢抽搐”为主要症状就诊，呈典型的低钙抽搐表现，发病年龄较早但无生长发育迟缓，无AHO表型。3例患者面神经叩击征（Chvostek征）阳性、束臂试验（Trousseau征）阳性。实验室生化检查显示4例患者均有血钙降低、血磷升高、血清PTH升高的特点，血清碱性磷酸酶（ALP）正常，甲状腺功能检查未见明显异常。头颅CT显示所有患者均存在不同程度的颅内钙化，眼科检查发现2例患者存在白内障。部分患者分别接受了四肢骨骼和腹部的X线摄片检查以及骨密度检查，均未见异常。
2）初步诊断和治疗情况：根据患者的症状、体征、家族史以及实验室辅助检查等，4例患者均初步诊断为散发型PHPIb。嘱患者高钙低磷饮食，急性发作期给予静脉注射10%葡萄糖酸钙溶液以缓解抽搐等症状，非急性发作期给予口服钙剂（如口服碳酸钙）、维生素D或其衍生物（如骨化三醇）治疗，患者的病情均能得到良好控制，症状得以缓解，抽搐发作频率明显降低，并且血钙基本能维持在正常值范围内。
3）外显子PCR和直接测序结果显示：4例PHPIb患者及其父母在GNAS基因的1-13号外显子均未发现突变，仅发现一个单核苷酸多态性（SNP）位点。
4）MSP结果显示：在外显子1A区域，2例患者的甲基化特异性引物（M）未扩增出目的条带而非甲基化特异性引物（U）扩增出条带，1例患者的U引物未扩增出目的条带而M扩增出条带：在NESP55区域，2例患者的U引物没有扩增出目的条带而M引物扩增出条带；在XLαs区域，2例患者的M引物没有扩增出目的条带而U引物扩增出条带。以上结果均提示患者存在不同程度的印记缺陷。患者的父母及10例正常对照在3个DMR上的两对引物都扩增出了目的条带，提示为基因正常印记。
结论：
1）GNAS基因DMR启动子甲基化状态的改变所导致的印记缺陷是散发型PHPIb主要的致病原因。
2）通常情况下PHP可以通过症状、体征和生化检查来进行临床诊断，然而并不能够对该病进行明确分型。采用MSP技术来检测GNAS基因DMR启动子区的甲基化异常可以作为PHPIb的较为简便而快捷的基因诊断和疾病分型的方法。