慢性粒细胞性白血病（chronic　myelogenous　leukemia,　CML）是一类源于造血干细胞伴有t（9;22）（q34;q11）染色体易位（Philadelphia　chromosome，Ph染色体）的恶性增殖性疾病。CML自然病程大致可分为慢性期（chronic　phase,　CP）、加速期（accelerated　phase，AP）和急变期（blastic　phase,　BP），进展到急变期的CML细胞失去分化潜能，发育停滞在早期淋系或髓系阶段，称为CML急淋变或急粒变。此时无论采用酪氨酸激酶抑制性药物、造血干细胞移植手术或联合化疗，都难以达到很好的效果，患者死亡率极高。因此，研究CML病程发展机制对提高临床治疗效果有着非常重要意义。
由Ph染色体编码的BCR-ABL1融合蛋白具有高度异常的酪氨酸激酶活性，能够促使细胞恶性转化。BCR-ABL1融合蛋白持续表达，激活细胞内一些肿瘤形成的信号传导通路，使细胞增殖加快和凋亡受抑；同时引起某些基因的表观遗传修饰改变，造成基因异常活化；并出现了除Ph染色体以外，例如基因片段丢失、易位和突变等其他染色体异常，产生机理尚不完全清楚。
B细胞转录因子IKZF1(Ikaros　family　zinc　finger　1)　基因的部分缺失，是CML急淋变过程中较常见的一种基因损伤现象。Ikaros是IKZF1基因编码的淋巴细胞转录因子，有调控淋巴细胞分化、发育和抑制血液系统肿瘤的作用。在CML急淋变患者中，最常见的IKZF1基因缺失类型是3-6号外显子缺失产生的异构体IK6（Ikaros　isoform　6），IK6编码的Ikaros完全缺失了N端的4个C2H2的锌指结构，不能与DNA结合进而影响正常的调控淋巴细胞发育和抑制血液系统肿瘤作用。相关研究目前推测IKZF1基因的部分缺失与CML急淋变的病情发展有密切关系，但对于IKZF1发生断裂机制，依然没有明确的阐释。由于只在CML急淋变患者中，才会出现高频的IKZF1部分缺失，因此可能由于淋巴细胞特有的某些因素造成了IKZF1的断裂和修复。
未成熟的B、T淋巴细胞是生理情况下唯一能够产生基因重排的体细胞，它们通过DNA重组机制产生了种类众多、数量巨大和具有特异性识别抗原的免疫球蛋白和T细胞受体等抗原受体分子，对淋巴细胞发育和机体产生获得性免疫应答起着决定性作用，确保机体能够抵御外界多种病原体入侵、维持正常的免疫功能和清除体内出现的肿瘤细胞。重组激活基因（recombination　activating　gene，RAG）1和2　编码的重组激活基因蛋白（RAG1和RAG2）组成RAG重组酶，是抗原受体基因发生重排过程中断裂DNA的关键酶。每一个抗原受体基因片段旁都含有特异性重组信号序列（recombination　signal　sequence，RSS），并且抗原受体基因片段发生重组前，首先会出现高水平的转录、组蛋白乙酰化和H3K4me3。RAG重组酶通过RAG2与H3K4me3的结合作用，以及RAG1与RSS的结合作用，催化断裂RSS序列，完成其断裂DNA促使抗原受体基因片段重排的功能。
哺乳动物基因组测序显示许多非抗原受体基因DNA序列中含有类似RSS序列，称这类序列为cryptic　RSS（cRSS）。在体外实验中RAG有可能催化断裂cRSS，并且在肿瘤环境中，RAG可能对某些原癌基因的cRSS产生错误地靶向作用。实验室前期研究证实CML慢性期细胞IKZF1正常，CML急淋变后，细胞表达RAG，IKZF1形式为IK6；利用PCR检测到IKZF1的2号和6号内含子发生断裂，并且断裂点序列具有cRSS特征。
因此本课题推断，BCR-ABL1的存在造成了体内基因组不稳定，改变了某些基因例如IKZF1的表观遗传修饰，可能促使RAG通过H3K4me3结合并断裂IKZF1内含子的cRSS，导致了IKZF1基因的断裂，使Ikaros失去其结合DNA的锌指结构，影响其调节淋巴细胞发育的功能，造成淋巴细胞发育和增殖出现异常，促进CML由慢性期向急性期的转变。
本实验通过在BCR-ABL1+的CML细胞中过量表达RAG，检测IKZF1基因的cRSS位点上H3K4me3的富集和RAG的结合，从而阐述CML急淋变中IKZF1的断裂机制，为解释CML病程发展机制和提高临床治疗效果提供新的思考方向。
本课题的主要工作包括：制备检测RAG的蛋白抗体，构建RAG1的慢病毒表达载体，在293T细胞中检测RAG蛋白的功能活性，包装RAG的慢病毒表达载体并侵染K562细胞，检测IKZF1基因的表观遗传修饰、断裂和RAG结合情况。
通过将RAG的慢病毒载体转入CML细胞系——K562细胞中，本实验成功构建了过表达RAG1和RAG2蛋白的K562细胞；使用染色体免疫共沉淀技术（Chromatin　immunoprecipitation　assay，ChIP）检测到此类细胞中IKZF1基因cRSS位点上有组蛋白H3K4me3富集和RAG的结合，显示RAG很可能是造成了IKZF1的断裂的原因。为揭示CML急淋变中IKZF1基因断裂形成机制和CML病程发展提供新的证据，有助于预测淋巴系统肿瘤发生的位点，协助临床上最终实现个体化治疗。