背景：
肝细胞癌是最为常见的恶性肿瘤之一，位于肿瘤致死病因的第三位。侵袭转移是导致肝癌患者死亡的主要原因，但至今仍缺乏有效的防治手段。黄芩素是从中药黄芩中提取的一种化合物，具有多种生物学功能，包括抗炎、抗肿瘤等。本课题组的前期研究结果显示，黄芩素能够通过抑制ERK信号通路的活性抑制肝癌细胞的增殖，且相同浓度的黄芩素对正常肝细胞无明显毒性，提示黄芩素可能会成为一种高效低毒的抗肝癌药物。但目前针对黄芩素的抗肝癌细胞侵袭转移作用及其机制鲜有文献报道。
目的：
通过观察黄芩素对肝癌细胞体外及裸鼠体内侵袭转移的影响，明确黄芩素抑制肝癌细胞侵袭转移的作用，并以侵袭转移相关分子和ERK信号通路为观察指标，初步探讨其分子机制，为开发黄芩素应用于肝癌的治疗提供进一步的实验依据。
方法：　
1.　黄芩素对肝癌细胞体内外侵袭转移的影响：
体外实验　MHCC97H肝癌细胞：①分别以0、5、10、20、30、40、50和60　μM浓度黄芩素干预24h，MTT法检测各组MHCC97H肝癌细胞的增殖情况；②分别以0、10、20和30　μM浓度黄芩素干预24h，Transwell小室检测各组MHCC97H肝癌细胞的侵袭能力。
体内实验　4w龄/体重约20g裸鼠，开腹直视肝包膜下注射1×106个MHCC97H肝癌细胞，随机分为治疗组和对照组，每组10只，造模后第一天治疗组给予10mg/kg?d黄芩素口服，对照组以相同方式给予等体积DMSO。连续干预21d后，处死裸鼠，取肝脏和肺脏等标本检测肝癌细胞原位种植瘤情况及肺转移的发生率、转移结节的数目和大小。
2.　黄芩素对肝癌细胞侵袭转移相关分子的影响：
MHCC97H肝癌细胞，分别以0、10、20和30　μM浓度黄芩素干预24h，观察各组细胞以下侵袭转移相关分子的表达情况：①Western-blot检测各组细胞中MMP-2、MMP-9和u-PA的蛋白表达水平；②　Western-blot检测各组细胞中TIMP-1和TIMP-2的蛋白表达水平；③明胶酶谱法检测各组细胞培养上清中MMP-2、MMP-9和u-PA的蛋白酶活性；④　Western-blot检测各组细胞中MEK1、ERK1/2、p-MEK1和p-ERK1/2的蛋白表达水平。
以pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)-MEK1重组载体转染MHCC97H肝癌细胞，分别以0、10、20和30　μM浓度黄芩素干预两组细胞24h，Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力。
以MHCC97H肝癌细胞为研究对象，分别以0μM浓度黄芩素、10μM浓度黄芩素、10μM浓度ERK信号通路抑制剂（U0126）及10μM浓度黄芩素和10μM　浓度U0126合用干预24h，Transwell小室和Western-blot分别检测各组细胞侵袭转移能力的改变和侵袭转移相关分子的表达情况。　
结果：
1.　黄芩素对肝癌细胞体内外侵袭转移的影响
体外实验：随着黄芩素浓度的增加，MHCC97H肝癌细胞的增殖能力逐渐减弱，当浓度大于50μM时，黄芩素能够明显抑制MHCC97H肝癌细胞的增殖（P＜0.05）。与对照组相比，黄芩素（10μM、20μM、30μM）作用MHCC97H肝癌细胞24h　后，穿过基质胶到达小室底端的肝癌细胞数量明显减少，分别为对照组的（60.31±7.91）%、（44.81±6.86）%　和（21.87±3.94）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）。
体内实验：与对照组相比，黄芩素治疗组裸鼠肝癌细胞原位种植肺转移的发生率显著降低（70%　vs　100%，P＜0.05），平均肺转移结节数明显减少（4.33±3.5　vs　12.34±3.8，P＜0.05）。　
2.黄芩素对肝癌细胞侵袭转移相关分子的影响：
与对照组相比，黄芩素（10μM、20μM、30μM）作用MHCC97H肝癌细胞24h　后：①细胞中MMP-2的蛋白表达水平逐渐降低，分别为对照组的（47.86±1.69）%、（20.72±1.34）%　和（14.81±0.93）%，细胞中MMP-9的蛋白表达水平逐渐降低，分别为对照组的（57.21±1.76）%、（15.57±1.24）%　和（4.65±0.79）%，细胞中u-PA的蛋白表达水平逐渐降低，分别为对照组的（37.86±1.87）%、（27.13±1.52）%　和（13.53±0.93）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）；②　细胞中TIMP-1的蛋白表达水平逐渐升高，分别为对照组的（141.07±6.31）%、（385.98±42.16）%　和（519.05±86.97）%，细胞中TIMP-2的蛋白表达水平逐渐升高，分别为对照组的（111.55±4.19）%、（208.85±21.28）%　和（258.52±43.33）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）；③　细胞培养上清中MMP-2的蛋白酶活性逐渐降低，分别为对照组的（49.84±3.91）%、（27.36±1.23）%　和（2.44±0.80）%，细胞培养上清中MMP-9的蛋白酶活性逐渐降低，分别为对照组的（58.77±2.42）%、（23.98±1.21）%　和（8.19±0.42）%，细胞培养上清中u-PA的蛋白酶活性逐渐降低，分别为对照组的（37.27±1.94）%、（14.98±1.68）%　和（3.66±0.63）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）；④细胞中MEK1的磷酸化水平逐渐降低，分别为对照组的（67.76±7.46）%、（29.63±6.43）%　和（10.52±2.12）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）；⑤　细胞中ERK1/2的磷酸化水平逐渐降低，分别为对照组的（78.23±6.75）%、（43.75±4.32）%　和（26.65±4.26）%，治疗组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）。
与转染pcDNA3.1(+)空载体组相比，转染pcDNA3.1(+)-MEK1重组载体组MHCC97H肝癌细胞穿过基质胶到达小室底端的数量明显增多，为转染pcDNA3.1(+)空载体组的（158.6±6.12）%，两组之间具有显著差异（P＜0.05）；与转染pcDNA3.1(+)空载体组相比，黄芩素（10μM、20μM、30μM）作用24h　后，转染pcDNA3.1(+)-MEK1重组载体组MHCC97H肝癌细胞穿过基质胶到达小室底端的数量明显增多，两组抑制率分别为（12.88±0.75）%和（9.64±0.56）%，（69.72±2.31）%和（43.4±1.91）%，（90.48±3.72）%和（71.36±3.12）%，两组之间具有显著差异（P＜0.05）。　
与单独黄芩素干预组相比，U0126预处理组MHCC97H肝癌细胞穿过基质胶到达小室底端的数量明显减少，分别为对照组的（56.32±2.13）%和（19.23±0.91）%，两组之间具有显著差异（P＜0.05）；与单独黄芩素干预组相比，U0126预处理组MHCC97H肝癌细胞中MMP-2、MMP-9和u-PA的蛋白表达水平显著降低，分别为对照组的（86.96±3.47）%和（16.67±0.28）%，（86.56±1.36）%和（11.01±0.12）%，（35.89±2.77）%和（17.76±0.52）%，两组之间具有显著差异（P＜0.05），TIMP-1和TIMP-2的蛋白表达水平明显升高，分别为对照组的（253.06±11.47）%和（485.71±30.2）%，（194.11±11.96）%和（427.45±10.96）%，两组之间具有显著差异（P＜0.05）。
结论：
黄芩素在体内外均具有良好的抗肝癌细胞侵袭转移作用。这种作用与其抑制ERK信号通路活性，进而调节MMP/TIMP表达平衡和u-PA的表达相关。