摘　　要
研究背景：
结直肠癌（colorectal　cancer，CRC）是由遗传和环境因素共同累积所致的大肠粘膜上皮恶性肿瘤，多数CRC由腺瘤性息肉发展而来，少数来源于林奇综合征、家族性腺瘤性息肉病（familial　adenomatous　polyposis，FAP）或者具有家族倾向性的CRC。CRC是常见的恶性肿瘤之一，且具有较高的致死率，给社会、家庭、个人带来了极大的负担，所以针对CRC的研究一直备受关注。与CRC相关的危险因素较多，其发病机制涉及多条分子转导通路。近年来，关于肠道菌群与CRC的关系的研究逐渐增多，应用宏基因组技术，发现CRC患者肠道内细菌的种类和数量发生明显变化，主要表现为肠道内细菌种类、数量减少，尤其是益生菌的种类和数量减少，但是条件致病菌却呈现出明显增多的现象。国外研究表明，肠道内多种杆菌与CRC有关，其中产肠毒素脆弱拟杆菌（enterotoxigenic　B.　fragilis，ETBF)、具核梭杆菌（Fusobacterium　nucleatum，Fn）在CRC患者肠道内富集程度高于正常人，ETBF、Fn可以通过多条信号转导通路致病。还有文献报道幽门螺旋杆菌（Helicobacter　pylori，Hp）相关性胃炎与CRC的发生有关，然而三种细菌的具体致病机制尚不清楚，有待进一步研究。在国内，关于ETBF、Fn、Hp与CRC关系的研究较少。几乎没有关于ETBF、Fn、Hp对CRC致病机制的研究。
目的：
本实验主要在中国人群中进行研究，考虑腺瘤性息肉为CRC的癌前病变，选择腺瘤性息肉患者、CRC患者、正常对照组为研究对象，同时收集了他们的粪便、组织样本，同时检测粪便和组织中ETBF、Fn、Hp的富集程度，来探究三种细菌与腺瘤性息肉、CRC的关系。此外用免疫组化方法检测CRC和正常对照组中EGFR、p53的表达，探究不同表达强度的EGFR、P53与三种细菌在肠道富集程度的关系。
方法：
1.　标本收集：选择西安交通大学第二附属医院消化内科住院和门诊病人，根据患者选择和排除标准，选择腺瘤性息肉患者31人、CRC患者24例，分别收集他们的粪便、病变组织、病变旁组织。选择符合标准的正常对照组20人，收集他们的粪便和肠粘膜组织。将收集标本统一冻存于－80℃冰箱中。
2.　RT-PCR检测：用试剂盒提取粪便和组织中的DNA，进行RT-PCR检测，得到各标本的CT值，以载入目的基因的质粒标准品建立标准曲线和回归方程，将CT值带入回归方程，得出各标本中不同细菌的拷贝数。
3.　免疫组化检测EGFR、p53：用Fromowitz方法将对不同表达强度的EGFR、P53进行分组，比较不同表达强度的EGFR、P53与细菌拷贝数的关系。
结果：
1.　三组研究对象的粪便中ETBF、Fn拷贝数呈现出：CRC组＞腺瘤性息肉组＞正常对照组（P＜0.05）。Hp拷贝数呈现出CRC组＞正常对照组（P＜0.01），腺瘤性息肉组＞正常对照组（P＜0.01）。粪便中CRC组三种细菌拷贝数高于正常组95%分为数的比例较高。
2.　腺瘤性息肉组、CRC组的病变组织与病变旁组织中三种细菌的富集程度均没有统计学差异。
3.　三组研究对象的组织中ETBF、Fn拷贝数呈现出：CRC组＞腺瘤性息肉组＞正常对照组（P＜0.05）。组织粘膜中的Hp拷贝数呈现出CRC组＞正常对照组（P＜0.01），腺瘤性息肉组＞正常对照组（P＜0.01）。组织中CRC组三种细菌拷贝数高于正常组95%分为数的比例较高。
4.　CRC组中不同表达强度的EGFR、p53与三种细菌的拷贝数无明显相关性。
结论：
1.　ETBF、Fn、Hp能促进腺瘤性息肉、CRC的发生。且ETBF、Fn在肠道内富集水平与疾病的进展有相关。Hp不仅仅可以定植于胃黏膜，而且可能可以定植于肠粘膜而致病。
2.　以健康对照组细菌拷贝数的95%分位数为参考值，筛查受检者粪便或者组织中三种细菌的拷贝数，高于此参考值的受检者为CRC高危人群，需要进一步检查。
3.　CRC中EGFR、P53的不同表达强度与三种细菌的数量无明显关系，三种细菌并不仅仅通过直接作用导致CRC的发生，更主要是通过改变肠道内环境，参与到多种致病通路中，促进CRC的发生。

关　键　词：结直肠癌；腺瘤性息肉；产肠毒素脆弱拟杆菌；具核梭杆菌；幽门螺旋杆菌
论文类型：应用基础研究