研究背景：
肺癌是人类常见的恶性肿瘤。虽然近些年来肺癌的诊断和治疗技术不断地在提高，其5年生存率仍较低。目前肺癌的发病机制尚未完全阐明，其中肺癌发生发展的分子机制研究为进一步了解、认识肺癌提供了大量的信息。因此，寻找新的分子标志，对预后评价或者成为治疗新靶点，是研究肺癌的重要方法。
E26转录因子（E26　transformation-specific，ETS）家族是最大的信号依赖转录调控因子家族之一。EHF（ETS　homologous　factor）是上皮特异性ETS（epithelium-specific　ETS，ESE）转录因子亚家族成员之一，近年来发现EHF基因在不同肿瘤的发生发展中发挥不同作用。EHF在前列腺癌中发挥抑癌作用，在卵巢癌和乳腺癌中可能发挥促癌作用，提示EHF在肿瘤中的表达可能具有异质性，在不同的肿瘤微环境发挥不同的作用。然而，EHF在肺癌研究较少，有进一步深入研究的价值。
研究目的：
1.　明确EHF基因在非小细胞肺癌组织中的表达情况。
2.　揭示EHF表达对非小细胞肺癌患者预后的影响。
3.　初步探讨EHF在非小细胞肺癌发生发展中的生物学作用及其分子机制。
实验方法：
1.　分别通过普通反转录PCR（reverse　transcription-PCR，RT-PCR）及反转录实时定量PCR（RT-quantitative　PCR，RT-qPCR）的方法分别检测非小细胞肺癌细胞系及非小细胞肺癌组织中EHF基因的表达情况。
2.　利用在线数据分析EHF在非小细胞肺癌肿瘤组织及正常组织中的表达情况，及其与患者预后的关系。
3.　明确EHF对非小细胞肺癌细胞恶性行为的影响。
1）应用小干扰RNA（small　interferingRNA，siRNA）敲减肺癌细胞系中EHF基因的表达，然后利用MTT法及平板克隆形成实验检测EHF基因表达下调后对增殖及克隆形成能力的影响；同时过表达EHF进一步验证该基因对细胞上述生物学行为的影响。
2）应用Transwell小室检测敲减EHF基因对肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响；过表达EHF后反向验证对肺癌细胞迁移、侵袭的影响。
3）应用流式细胞仪检测敲减EHF基因后肺癌细胞周期和细胞凋亡的变化。
4）构建裸鼠皮下移植瘤模型，观察敲减EHF基因后对裸鼠成瘤能力的影响。
4.　应用RT-qPCR及Western　Blot等方法初步探讨EHF对肺癌细胞影响的分子机制。
5.　明确转录因子EHF对RTKs家族部分成员的转录调控作用。
1）应用双荧光素酶报告基因系统检测EHF对ERBB2、ERBB3及MET启动子活性的转录调控作用。
2）利用染色质免疫共沉淀（chromatin　immunoprecipitation，ChIP）的方法检测EHF在体内与ERBB2、ERBB3及MET基因启动子区的结合情况。
实验结果：
1.　EHF在非小细胞肺癌组织的表达水平较对应非肿瘤组织明显升高（24.05±47.61　vs.　3.94±5.40，P＜0.05）。
2.　非小细胞肺癌患者中高表达EHF提示预后不良（HR=1.41　(1.12-1.77)，P＜0.01）。
3.　EHF的mRNA水平在PC9、LTEP-s、A549等细胞中较高。
4.　敲除EHF后可抑制非小细胞肺癌细胞系的增殖及平板克隆形成能力，诱导肺癌细胞发生G0/G1期阻滞及细胞凋亡，抑制肺癌细胞的迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力；同时过表达后可诱导细胞的增殖及平板克隆形成能力，细胞迁移、侵袭能力的增强。
5.　敲除EHF后可下调ERBB2、ERBB3及MET的表达；同时Western　Blot结果也显示EHF表达下调后可抑制　PI3K/Akt　及MAPK　信号通路的活性。　
6.　双荧光素酶报告基因及ChIP-qPCR结果证实EHF可直接结合ERBB2、ERBB3及MET启动子区，并转录激活上述基因。
结论：
1.　EHF在非小细胞肺癌中属于癌基因。
2.　EHF对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移的影响至少部分通过RTKs家族成员及下游的PI3K/Akt　及MAPK　信号通路。
3.　EHF有望成为非小细胞肺癌治疗靶点。