研究目的　
比较不同剂量的大气压低温等离子体（Low　Temperature　Plasma，LTP）对BALB/c小鼠伤口愈合的影响，探讨LTP促进小鼠伤口愈合的最佳剂量以及影响伤口愈合的机制。
研究方法　
1.　LTP的产生：以氩气为工作气体，采用大气压等离子体射流方法产生LTP射流。采用发射光谱法分析探讨LTP射流的成分。
2.　伤口模型的制作：选择60只5-6周龄的普通BALB/c小鼠，在较为安静的环境下进行伤口模型的制作。对小鼠进行麻醉，待小鼠意识消失后，固定小鼠，利用制孔器在小鼠背部皮肤的左右两侧制作两个对称的直径约为4　mm的伤口，所制作的伤口模型深达肌层。
3.　实验处理及伤口检测：将60只小鼠完全随机分为6组，每组10只。其中1-5组对应的LTP伤口处理时间分别为10　s、20　s、30　s、40　s、50　s，第6组用人重组表皮生长因子处理伤口。每只小鼠的左侧伤口用LTP射流（第1-5组）和人重组表皮生长因子（第6组）进行处理，右侧伤口自然愈合作为阴性对照（0组）。每天用LTP和人重组表皮生长因子处理伤口，每天1次，连续14　d。在LTP处理前由同一实验员对伤口进行测量并记录。测量记录每只小鼠左右两侧伤口的面积，计算出1-6组的伤口面积减对应0组伤口面积的差值（Superficial　Difference，SD），即左侧伤口面积减右侧伤口面积。
4.　形态学观察与免疫组化：取处理第7天的伤口组织，采用HE染色以及免疫荧光技术，从形态学和免疫组化的水平检测肉芽组织、新生血管、成纤维细胞、I型胶原蛋白（Type　I　Collagen，COL-I）、表皮生长因子（Epidermal　Growth　Factor，EGF）在伤口愈合过程中的变化。
5.　COL-I与EGF的检测：取处理第7天的伤口组织，采用Western　blot技术和实时荧光定量PCR技术，分别从蛋白水平和基因水平检测COL-I与EGF在伤口愈合过程中的变化。
6.　统计学分析：实验所得数据均用Epidata软件进行录入，使用SPSS　11.0软件进行统计分析。计量资料的测量值用均数±标准差表示。伤口面积的差值（SD）采用重复测量数据的方差分析；累积光密度值、Western　blot条带的光密度值以及实时荧光定量PCR检测的基因相对含量均采用单因素方差分析进行统计，基于方差分析的后续检验即处理组与对照组的比较采用Dunnett-t检验进行分析。检验水准α为0.05，以P　＜　0.05认为差异有统计学意义。实验重复次数为3次，保证实验的可靠性、重复性。
研究结果
1.　发射光谱诊断发现LTP中含有OH、NO、激发态N2分子以及激发态O原子等具有较高活性的自由基。
2.　伤口尺寸变化：10　s、20　s、30　s、40　s处理组的小鼠伤口愈合速度较快，分别在第12、10、7、13天基本愈合，而50　s处理组的小鼠伤口在第14天尚未愈合；阳性对照组的小鼠伤口在第7天全部愈合，30　s处理组可以达到阳性对照组小鼠伤口愈合的效果。
3.　HE染色：30　s处理组可以最大限度的促进伤口表皮再生，肉芽组织增生和胶原沉淀，促进成纤维细胞、中性粒细胞与巨噬细胞的增殖。50　s处理组有大量的炎性细胞浸润，表面有明显的渗出，深部细胞增殖较差。
4.　免疫荧光染色技术：与阴性对照组相比，30　s处理组伤口组织中成纤维细胞的数量、COL-I及EGF的合成和分泌明显增加（P　＜　0.05），与阳性对照组相比，差异无统计学意义（P　＞　0.05）；而50　s处理组中成纤维细胞的数量、COL-I及EGF的合成和分泌明显减少，低于阴性对照组（P　＜　0.05）。
5.　Western　blot：与阴性对照组相比，30　s处理组伤口组织产生及分泌的COL-I与EGF较多（P　＜　0.05），与阳性对照组基本一致（P　＞　0.05）。50　s处理组则抑制伤口组织产生及分泌COL-I与EGF，其含量低于阴性对照组（P　＜　0.05）。
6.　实时荧光定量PCR：与阴性对照组相比，30　s处理组伤口组织中COL-I基因与EGF基因含量较多（P　＜　0.05），与阳性对照组基本一致（P　＞　0.05）。50　s处理组则伤口组织中的COL-I基因与EGF基因含量较少，低于阴性对照组的含量（P　＜　0.05）。
研究结论　
1.　LTP中含有OH、NO等活性自由基。
2.　合适剂量的（23.88　J•cm-2）LTP可促进小鼠的伤口愈合，而过量（39.8　J•cm-2）的LTP则会抑制小鼠伤口的愈合。
3.　关于LTP影响伤口愈合的机制，适量（23.88　J•cm-2）的LTP可以促进伤口组织中肉芽组织增生、成纤维细胞增殖，COL-I以及EGF的合成和分泌增加，进而促进伤口表皮再生，加速伤口愈合。而过量（39.8　J•cm-2）的LTP剂量则会导致伤口组织有大量的炎性细胞浸润，成纤维细胞数量、COL-I以及EGF的合成和分泌减少，进而延缓皮肤伤口的愈合。LTP对伤口愈合的影响可能与其含有的活性自由基有关。