本发明提供了一种HBeAg的转基因小鼠模型的构建方法和应用。通过采用CRISPR/Cas9技术，通过同源重组的方式，在Rosa26基因位点将HBeAg基因定点插入pliver‑HBeAg表达框，通过In‑Fusion cloning方法构建重组R26‑e(Alb‑HBeAg)1打靶载体，该载体包含3.3kb 5’同源臂、pliver‑HBeAg和3.3kb 3’同源臂；将Cas9mRNA、gRNA和重组R26‑e(Alb‑HBeAg)1打靶载体显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，随后将受精卵移植入C57BL/6J雌性小鼠子宫，经过逐步繁殖纯化，获得HBeAg转基因小鼠。该转基因小鼠能在肝脏特异性表达HBeAg，因而，可用于研究HBeAg感染机制、评价慢性乙型肝炎治疗性药物和疫苗治疗效果的实验动物模型。