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李扬程 (李扬程.)

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目前,我国5岁儿童的乳牙龋患病率为70.9%,其中接受治疗的龋齿比例仅为4.1%。此外,儿童龋病经治疗后仍可能出现继发龋,如何更有效地控制儿童龋病治疗后继发龋或新龋的发生是一大难题。
微生物的作用是牙齿发生龋坏的核心因素,其中变异链球菌的数量在一定程度上反应了龋易感性和龋坏的程度。近年来的研究认为,龋病的发生并不是某种特异微生物作用所致,而是口腔内微生物动态平衡被打破的结果,因此从微生物群落的角度来分析龋病的发生发展更有利于我们认清微生物在龋病中发挥的作用。
研究目的:
1. 观察重度低龄儿童龋患儿唾液中变异链球菌数量在治疗前后的差异以及治疗后半年内变异链球菌数量的动态变化情况。
2. 探索重度低龄儿童治疗前后唾液微生物群落多样性和结构的变化,分析与龋病密切相关的微生物及其在龋病治疗后半年内的动态变化情况。
意义:
1. 为动态监测低龄儿童龋易感性变化提供理论依据。
2. 了解与龋病密切相关的微生物,从微生物的角度为龋病防治提供依据。
研究方法:
1. 复苏变异链球菌,梯度稀释并培养后计算菌液浓度,提取基因组DNA ,对DNA进行稀释后进行qPCR,根据各稀释倍数和相应的CT值建立标准曲线。
2. 临床上选择重度低龄儿童龋患儿48名,口腔检查记录患龋状况,采集唾液。提取样本基因组DNA, qPCR反应获得样本CT值,根据标准曲线计算唾液中变异链球菌的数量,使用SPSS22.0软件完成统计分析,比较患儿治疗前后唾液变异链球菌数量的差异。
3. 从样本人群中抽取15名患儿,对提取的样本DNA进行PCR扩增,检验后进行测序。
4.对测得的序列进行物种注释,通过统计学分析,比较治疗前后微生物群落的差异。
研究结果:
1. 治疗前唾液变异链球菌数量平均为6.42±9.36×105CFU/ml,治疗后3个月唾液变异链球菌数量平均为1.07±2.53×105CFU/ml,治疗后6个月变异链球菌数量平均为1.22±2.37×105CFU/ml,治疗后与治疗前相比唾液变异链球菌数量显著减少。
2. SECC治疗前后三组的微生物物种多样性无明显差异,但群落构成有显著差异,治疗前微生物群落结构更离散。从属水平看,治疗后相对丰度逐渐降低的有Solobacterium、奇异菌属、乳杆菌属和金氏杆菌属,逐渐升高的有罗氏菌属、放线杆菌属,奈瑟菌属则可能存在先上升后下降的情况。从种水平看,治疗后相对丰度逐渐降低的有产黑色素普鲁沃菌、变异链球菌、Solobacterium moorei、分生艰难杆菌、竖硬棒状杆菌和罗伊氏乳杆菌等几种乳杆菌,产丙酸丙酸杆菌在治疗后3个月即降低至较低水平,逐渐升高的是红串红球菌,口腔奈瑟菌表现出先上升后下降的趋势。
3. 口腔中存在属水平的核心菌群,在所有样本中共有的属有24个,其中相对丰度前10的属占83.5%~87.7%。
结论:
1. qPCR检测唾液中微生物的数量有较高的可信度,SECC患儿经完善的龋病综合治疗后唾液变异链球菌数量显著降低,接近无龋儿童唾液变异链球菌数量;
2. SECC患儿治疗后唾液微生物种类无明显变化,但是群落结构会逐渐改变,微生物群落结构更聚集;
3. 口腔微生物群落中存在属水平的核心菌群。

Keyword:

变异链球菌 低龄儿童龋 实时定量PCR 微生物群落

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  • [ 1 ] 西安交通大学医学部

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Degree: 硕士

Mentor: 郭青玉

Student No.:

Year: 2018

Language: Other

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