研究背景：
甲状腺癌为内分泌系统最常见的恶性肿瘤，近年来发病人数急速增加。虽然大部分都属于分化型甲状腺癌，但其存在易复发及进展为低分化或未分化癌的风险，而且低/未分化甲状腺癌手术及化疗效果均欠佳，生存率极低。因此，寻找新的预后评价指标或治疗新靶点，为研究甲状腺癌提供新方向和思路。
ETS（E26　transformation-specific）即E26转录因子家族是最大的信号依赖转录调控因子家族之一，在肿瘤的发生发展中具有重要的调控作用。EHF（ETS　homologous　factor）是上皮特异性ETS（epithelium-specific　ETS，ESE）转录因子亚家族成员之一，近年来发现其参与肿瘤的发生和发展。EHF基因在卵巢癌和乳腺癌中可能发挥促癌作用；而在前列腺癌中可能发挥抑癌作用，提示EHF的生物学功能可能具有组织特异性。然而，EHF在甲状腺癌中的作用及其分子机制未见相关报道。
研究目的：
1）明确EHF在甲状腺癌中的表达情况。
2）明确EHF在甲状腺癌中的生物学作用。
3）阐明EHF促进甲状腺癌进展的分子机制。
实验方法：
1）分别利用实时定量RT-PCR（RT-qPCR）和western　blot等方法检测甲状腺癌和相应癌旁组织中EHF基因的表达情况。
2）明确EHF对甲状腺癌细胞恶性行为的影响：
（1）利用siRNA和表达载体分别敲减和外源性过表达甲状腺癌细胞中的EHF基因，并通过MTT和平板克隆形成实验评估EHF基因下调和过表达对甲状腺癌增殖及克隆形成能力的影响。
（2）利用流式细胞术检测敲除EHF基因对甲状腺癌细胞周期分布和凋亡的影响。
（3）构建甲状腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察敲减EHF基因对裸鼠成瘤能力的影响。
（4）利用Transwell小室评估敲减或过表达EHF基因对甲状腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。
3）明确EHF对HER家族基因的转录调控作用：
（1）通过RT-qPCR及western　blot方法探讨EHF与HER家族基因在甲状腺癌组织中表达的相关性，以及EHF对HER家族基因的调控作用。
（2）利用western　blot方法明确EHF对HER基因家族下游信号通路的调控作用。
（3）分别通过MTT及western　blot方法明确EHF通过调控HER2转录促进甲状腺癌细胞的增殖以及下游信号通路的激活。
（4）利用双荧光素酶报告基因系统检测EHF对EGFR、HER2及HER3启动子活性的转录调控作用。
（5）利用染色质免疫共沉淀（chromatin　immunoprecipitation，ChIP）方法检测EHF与EGFR、HER2及HER3基因启动子区的结合情况。
实验结果：
1）EHF在甲状腺癌组织的表达水平显著高于癌旁组织。
2）敲减EHF可抑制甲状腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力；同时诱导甲状腺癌细胞发生S期周期阻滞及细胞凋亡。反之，过表达EHF可促进甲状腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。
3）EHF的表达与HER2及HER3的表达呈正相关，敲减EHF基因可下调HER2及HER3的表达，进而抑制其下游PI3K/Akt　和MAPK/Erk信号通路的活性。相反，过表达EHF上调HER2及HER3的表达，并增强PI3K/Akt　及MAPK/Erk信号通路的活性。
4）HER2特异性抑制剂CP724714可降低EHF对甲状腺癌细胞增殖以及对PI3K/Akt　及MAPK/Erk信号通路的促进作用。
5）鉴定HER2及HER3为EHF的靶基因；EHF通过调控其转录导致其下游信号通路的激活，进而促进甲状腺癌的进展。
结论：
在本研究中，我们发现EHF在甲状腺癌中表达上调，并通过一系列体内外实验证实EHF的促癌作用。进一步研究揭示，EHF通过调控其靶基因HER2及HER3的转录激活其下游PI3K/Akt　及MAPK/Erk信号通路的活性，进而促进甲状腺癌的进展。综上，我们的数据提示EHF有望成为甲状腺癌治疗的潜在靶点。

关　键　词：甲状腺癌；转录因子EHF；HER家族；PI3K/Akt信号通路；MAPK/Erk信号通路
论文类型：应用基础