Abstract:
摘 要
背景:
前列腺癌是男性泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。前列腺癌的转移是该疾病进展或复发的标志之一,也是本病主要的致死原因。目前研究已经发现了一些参与前列腺癌进展和转移不同阶段的基因和信号通路,而CD82作为tetraspanin家族成员之一,最早在前列腺癌中发现其转移抑制作用,但关于CD82的功能以及相关机制尚不完全清楚。
目的:
本课题以前列腺癌转移为研究中心,以CD82分子为研究切入点,探讨CD82在前列腺癌中表达降低的原因;验证CD82对前列腺癌细胞迁移能力的抑制作用,研究其相关机制;初步探索CD82对前列腺癌血管形成的影响及相关机制。
方法:
1. 利用Western blot和qRT-PCR检测前列腺癌细胞与正常前列腺上皮细胞和良性前列腺增生细胞CD82的表达情况。运用siRNA和特异性抑制剂降低EZH2表达。Western blot和 qRT-PCR检测CD82的表达情况。通过染色质免疫共沉淀(ChIP)试验检测EZH2、H3K27me3是否与CD82启动子区域结合;
2. 在低表达CD82的前列腺癌细胞中运用过表达质粒转染或慢病毒感染升高CD82的表达,在相对高表达CD82的前列腺癌细胞中运用siRNA或慢病毒感染敲低CD82的表达。Transwell试验检测CD82对前列腺癌细胞迁移能力的影响。Western blot检测CD82对细胞E-钙粘素(E-cadherin)脱落的影响。免疫荧光检测过表达CD82的前列腺癌细胞E-cadherin、β-连环素(β-catenin)的表达及分布;
3. SiRNA干扰敲低ADAM验证ADAM在CD82对前列腺癌迁移及E-cadherin脱落中发挥的作用。免疫共沉淀(IP)试验检测ADAM与CD82的结合情况;
4. Transwell试验检测改变CD82的前列腺癌细胞条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的趋化作用。血管环样结构形成试验检测HUVEC血管形成能力。qRT-PCR及Western blot检测CD82对前列腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。
结果:
1. 前列腺癌与正常前列腺上皮和良性前列腺增生细胞系相比CD82的表达降低,且高侵袭能力细胞CD82表达低于低侵袭能力细胞。降低EZH2表达能够上调CD82表达。EZH2可以结合于CD82启动子区域,通过H3K27me3组蛋白甲基化调控CD82的表达;
2. CD82能够减少前列腺癌细胞表面E-cadherin的脱落,稳定E-cadherin/ β-catenin复合物,抑制前列腺癌迁移;
3. 敲低ADAM17能够逆转降低CD82引起的E-cadherin的脱落和细胞迁移。CD82通过直接结合ADAM17抑制其功能;
4. CD82抑制前列腺癌细胞趋化HUVEC,减弱HUVEC血管环样结构形成能力。CD82抑制前列腺癌细胞VEGF的表达。
结论:
1. CD82在前列腺癌细胞中表达低于正常前列腺细胞,高侵袭能力细胞CD82表达低于低侵袭能力细胞。EZH2介导的CD82启动子区域的组蛋白甲基化参与了其转录水平的调控;
2. CD82抑制前列腺癌细胞E-cadherin的脱落,有助于稳定E-cadherin/β-catenin复合物,从而抑制前列腺癌细胞迁移能力;
3. CD82通过直接与ADAM17结合抑制其对E-cadherin的剪切作用;
4. CD82降低前列腺癌细胞VEGF的表达,抑制肿瘤血管形成。
Keyword:
Reprint Author's Address:
Email:
Basic Info :
Degree: 医学博士
Mentor: 张心湜
Student No.:
Year: 2015
Language: Chinese
Cited Count:
WoS CC Cited Count: 0
SCOPUS Cited Count:
ESI Highly Cited Papers on the List: 0 Unfold All
WanFang Cited Count:
Chinese Cited Count:
30 Days PV: 7
Affiliated Colleges: