背景与目的：
宫颈癌（Cervical　cancer）是最常见的妇科恶性肿瘤之一，每年有超过200,000的女性死于宫颈癌。但遗憾的是，关乎其能否被根治的发病机制现如今仍不明确。近年来越来越多研究发现细胞干性相关的基因参与到了宫颈癌的发病过程中，这一思路为人类进一步探索宫颈癌的发病原因提供了方向。
ZNF基因家族被称为锌指DNA结合蛋白，属于一个保守的转录因子家族，在肿瘤的发生中起着重要作用。ZNF281（又被称为ZNP99和　ZBP-99）基因是该家族中的一员，通过直接激活和抑制目的基因来控制胚胎干细胞的多能性和肿瘤细胞的生长。但是迄今为止尚未见到研究ZNF281和宫颈癌发病之间关系的相关报道。因此本课题选取ZNF281基因作为研究对象，探讨ZNF281在宫颈癌发生发展中发挥的功能。以妇产科学，生物化学和分子生物学相关的基本原理为依据，通过一系列经典的分子生物学实验，测定ZNF281蛋白在宫颈癌中的表达状态，观察ZNF281蛋白表达上调后，ZNF281基因对于宫颈癌细胞的增殖和转移产生的影响。从而明确ZNF281在宫颈癌相关细胞株中的作用，并为进一步探讨其分子机制打下基础。
研究方法：
1.　本研究应用蛋白质印迹法（Western　blot）技术来检测ZNF281蛋白在正常宫颈组织，宫颈癌组织中的表达量差异。同时利用Western　blot技术来检测ZNF281蛋白在5种宫颈癌细胞系（HeLa，SiHa，C-33　A，CaSki，HT-3）中的表达情况。通过细胞免疫化学实验观察ZNF281蛋白在3种宫颈癌细胞系（HeLa，SiHa，C-33　A）中的定位，明确ZNF281蛋白的表达部位是在细胞核、细胞浆和/或细胞膜。
2.　以宫颈癌细胞HeLa作为反转录cDNA的模板，应用聚合酶链式反应（Polymerase　Chain　Reaction，PCR）技术扩增出ZNF281基因的CDS区，并构建了pIRES2-AcGFP-ZNF281真核过表达载体。在HeLa细胞中转染ZNF281过表达载体，使其稳定表达。
3.　采用细胞计数和MTT实验，以及裸鼠体内宫颈癌移植瘤实验观察ZNF281在体内外对于宫颈癌细胞增殖的影响。
4.　采用体外的Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验，观察ZNF281对于宫颈癌细胞的迁移能力和侵袭能力的影响。
5.　构建裸鼠肿瘤转移模型，观察ZNF281对于宫颈癌细胞的体内转移能力的影响。
6.　通过实时荧光定量PCR（Quantitative　Real-time　PCR，Q-PCR）和Western　blot，观察ZNF281对于宫颈癌细胞的上皮细胞间充质转化（Epithelial-Mesenchymal　Transition，EMT）过程的影响。
7.　实验结果采用SPSS18.0统计软件进行t检验。
研究结果：
1.　经Western　blot实验发现，ZNF281在宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常宫颈组织（P＜0.05）。宫颈癌细胞蛋白的Western　blot实验结果显示，ZNF281在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33　A、CaSki及HT-3中都具有一定表达的。细胞免疫化学染色显示，ZNF281在这HeLa，SiHa和C-33　A这3个宫颈癌细胞系中均是表达的，其表达主要定位于细胞浆及细胞核中。
2.　成功构建pIRES2-AcGFP-ZNF281过表达载体及其对照载体pIRES2-AcGFP。将所构建的质粒转染入宫颈癌细胞株HeLa和SiHa细胞后，利用G418筛选并用Western　blot鉴定出ZNF281稳定表达的HeLa-ZNF281细胞株及阴性对照HeLa-AcGFP细胞株。
3.　细胞生长曲线结果表明HeLa-GFP细胞和HeLa-ZNF281细胞在接种后1、3、5、7　d均无出现细胞数量上的差异（P＞0.05）。MTT结果显示HeLa-GFP细胞和HeLa-ZNF281细胞在接种后1、3、5、7　天均无出现OD值的差异（P＞0.05）。免疫缺陷小鼠移植瘤实验中，移植瘤生长曲线表明来源于HeLa-ZNF281细胞的移植瘤和来源于HeLa-GFP细胞的移植瘤相比，其的生长速度无显著性差异（P＞0.05）。综合上述结果可知ZNF281在体内和体外未能造成宫颈癌细胞的增殖变化。
4.　Transwell迁移和侵袭实验的结果均显示HeLa-ZNF281细胞穿出小室的数量明显多于HeLa-GFP细胞（P＜0.001）。以上结果可以证实ZNF281促进体外宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。
5.　构建裸鼠肿瘤转移模型，结果表明注射HeLa-ZNF281细胞的裸鼠肺部肿瘤病灶明显多于注射对照细胞的裸鼠（P＜0.05）。裸鼠肺组织的免疫组化染色结果显示，注射HeLa-ZNF281细胞的裸鼠肺部ZNF281的表达量显著高于注射HeLa-GFP细胞的裸鼠肺部的ZNF281的表达量（P＜0.001）。综合上述结果可知ZNF281促进体内宫颈癌细胞的转移。　
6.　Real-time　PCR　结果显示HeLa-ZNF281细胞株中Snail1的mRNA水平有明显的增高（P＜0.05），而Snail2（Slug）和ZEB1的mRNA含量出现明显的下降（P＜0.05）。Western　blot结果表明在宫颈癌细胞中过表达ZNF281后，上皮标志物E-cadherin（上皮细胞钙黏蛋白）表达量有所降低（P＜0.05），而Vimentin（波形蛋白）和C-myc的表达量出现升高（P＜0.05）。
结论：
这项研究显示了ZNF281会促进宫颈癌细胞的EMT进程，从而促进宫颈癌细胞的转移能力。